Q:產(chǎn)量低
A:
? 檢查細(xì)胞生長(zhǎng)情況,培養(yǎng)條件是否適合質(zhì)粒增殖。盡可能選擇高拷貝數(shù)的質(zhì)粒。
? 如果質(zhì)??截悢?shù)低,可適當(dāng)增加收集的菌液量,但是要保證菌體可以被完全裂解。
? 如果裂解液過(guò)于粘稠,應(yīng)適當(dāng)減少菌體量。
? 培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或在 2-8℃保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)明顯降低產(chǎn)量,建議使用新鮮的菌液。
Q:質(zhì)粒 DNA 中有基因組 DNA 污染
A:裂解時(shí)間不宜超過(guò) 5 分鐘。
Q:影響下游酶切
A:洗滌液 WB 洗滌后應(yīng)盡量離心去除殘留的液體,待硅膠膜完全干燥后再加入洗脫緩沖液。