助力霍亂檢測
近日，武漢大學(xué)通報(bào)出現(xiàn)一例確診霍亂病例，由于霍亂是甲級傳染病，所以該病例引起了廣泛關(guān)注。武漢市武昌區(qū)衛(wèi)生健康局7月11日公布后續(xù)情況：患者經(jīng)有效診治病情已得到控制，癥狀也已消失。目前未發(fā)現(xiàn)新增病例。
然而一波未平、一波又起！
7月13日，在武漢洪山區(qū)白沙洲市場水產(chǎn)品中檢出4份甲魚樣本霍亂弧菌陽性(O139群)。洪山區(qū)迅速啟動(dòng)應(yīng)急響應(yīng)，開展流調(diào)溯源、排查管控、環(huán)境采樣、終末消殺等處置工作。值得欣慰的是本次檢出的霍亂孤菌尚未引發(fā)人員感染。
在很多人的印象里，霍亂是一種古老且遙遠(yuǎn)的疾病。實(shí)際上在全球范圍內(nèi)，霍亂的威脅一直存在。對于霍亂，我們不必恐慌，但需要時(shí)刻警惕傳染病風(fēng)險(xiǎn)。
霍亂弧菌
霍亂，是由霍亂弧菌引起的一種急性腸道傳染病，以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，為我國甲類傳染病，也是國際檢疫傳染病。2018年，也門經(jīng)歷了歷史上最嚴(yán)重的霍亂疫情，同時(shí)，非洲一些國家也創(chuàng)下了該病死亡率的最高記錄。WHO專家估計(jì)，在世界范圍內(nèi)每年大約有130萬至400萬例霍亂，導(dǎo)致2.1-14.3萬人死亡。
霍亂弧菌屬于弧菌科，革蘭氏陰性菌，菌體短小呈逗點(diǎn)狀，有單鞭毛、菌毛，部分有莢膜。WHO腹瀉控制中心根據(jù)霍亂弧菌的菌體抗原特異性、生物性狀、致病性等不同，將其分為了3型，即O1 群霍亂弧菌、非 O1 群霍亂弧菌、不典型 O1 群霍亂弧菌。目前霍亂血清群已超過200種，其中只有血清群O1和O139可以引起霍亂。
霍亂第七次大流行
從有記載的霍亂暴發(fā)流行至今，霍亂已引起了七次世界大流行，且每次均從亞洲開始，再擴(kuò)散到其它大陸并延續(xù)多年。
目前全球范圍內(nèi)正在經(jīng)歷第七次世界大流行，此次大流行由埃爾托生物型霍亂弧菌引起，始于1961年的印度尼西亞，隨即傳遍了東南亞及西太平洋海域的大多數(shù)國家和地區(qū)。1964年后，霍亂已經(jīng)傳播到了亞洲內(nèi)陸國家和地區(qū)，1970年傳入非洲和歐洲，1973年傳入北美洲，1974年傳入大洋洲，1991年傳入拉丁美洲，從而遍及全球五大洲。
霍亂傳播途徑
患者及帶菌者是霍亂的主要傳染源，通過飲用或食用被霍亂弧菌污染的水或食物，接觸霍亂病人、帶菌者排泄物污染的手和物品以及食用經(jīng)蒼蠅污染過的食物等途徑傳播。
霍亂臨床癥狀
根據(jù)《全國霍亂監(jiān)測方案》，凡有腹瀉癥狀，且糞便、嘔吐物或肛拭子樣品培養(yǎng)O1群或（和）O139群霍亂弧菌陽性者，可為實(shí)驗(yàn)室確診病例。根據(jù)臨床表現(xiàn)，霍亂病程大致可分為3期。
● 瀉吐期
患者每日大便次數(shù)可達(dá)數(shù)次至十幾次，糞便的性狀也會(huì)變成水樣便，同時(shí)可能噴射性嘔吐。
● 脫水期
由于劇烈腹瀉及嘔吐，患者體內(nèi)水分和電解質(zhì)丟失嚴(yán)重。此時(shí)血容量下降可導(dǎo)致循環(huán)衰竭，患者有休克死亡風(fēng)險(xiǎn)。
● 恢復(fù)期
糾正脫水后，大多數(shù)患者癥狀消失，逐漸恢復(fù)正常。部分患者可出現(xiàn)發(fā)熱性反應(yīng)，一般持續(xù)1-3天后自行消退。
霍亂檢測方法
目前用于霍亂弧菌檢測的方法主要有微生物學(xué)方法、分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法，與微生物學(xué)方法相比，分子生物學(xué)方法應(yīng)用越來越廣泛。
● 微生物學(xué)檢測方法
● 分子生物學(xué)檢測方法
● 免疫學(xué)檢測方法
全式金作為國內(nèi)優(yōu)質(zhì)分子診斷原料供應(yīng)商，擁有16年分子生物學(xué)產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，深耕分子酶領(lǐng)域，可提供從霍亂孤菌核酸提取到檢測所需的核心原料，助力霍亂孤菌分子診斷產(chǎn)品的研發(fā)。
產(chǎn)品推薦
核酸提取
EasyPure? Bacteria Genomic DNA Kit（EE161）
? 裂解能力強(qiáng)
? 提取速度快
? 提取量高（高達(dá)20 μg）
? 純度高，離心柱高效、特異吸附DNA，有效去除蛋白質(zhì)、鹽類等雜質(zhì)。
核酸檢測
適用于以DNA為模板的LAMP擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增能力強(qiáng)、特異性高，在熒光定量法（染料法、探針法）LAMP反應(yīng)中具有良好的反應(yīng)性能。
? 操作簡單：包含反應(yīng)所需組分，只需自備模板及引物探針即可；
? 高效率：強(qiáng)鏈置換及聚合酶活性，實(shí)現(xiàn)恒溫條件下快速、高效、特異性的LAMP擴(kuò)增；
? 操作可視化：擴(kuò)增結(jié)果可通過肉眼觀察進(jìn)行判讀；
? 兼容dUTP/UDG：對dUTP耐受性好，添加dUTP/UDG有效防止LAMP產(chǎn)物污染，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。
擴(kuò)增靈敏度高
以不同濃度的番鴨細(xì)小病毒（MDPV）質(zhì)粒為模板，使用TransGen產(chǎn)品進(jìn)行LAMP擴(kuò)增。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品擴(kuò)增靈敏性高，特異性好，檢出限可達(dá)fg級別。
注：1*102 copies濃度為fg級別
擴(kuò)增速率快
在同等模板濃度條件下，分別使用TransGen產(chǎn)品和Company N產(chǎn)品進(jìn)行LAMP擴(kuò)增。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品擴(kuò)增速率更快。
反應(yīng)可視化
以非洲豬瘟病毒（ASFV）p72基因質(zhì)粒為模板，使用TransGen產(chǎn)品進(jìn)行濁度法、HNB、中性紅顯色法LAMP擴(kuò)增檢測，63 ℃反應(yīng)30 min。結(jié)果表明TransGen產(chǎn)品可進(jìn)行可視化操作，擴(kuò)增結(jié)果均可通過肉眼觀察進(jìn)行判讀。
PerfectStart? II Probe qPCR SuperMix UDG (AQ712)
在PCR體系中加入熒光探針，通過檢測熒光信號測定樣本核酸量，其組分中含有PerfectStart? Taq熱啟動(dòng)酶及特殊優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，可更加高效、精準(zhǔn)完成qPCR檢測。
? 3種抗體封閉，特異性高，靈敏度高，擴(kuò)增效率高；
? 特殊優(yōu)化的qPCR反應(yīng)緩沖液，可提供更高的靈敏度和特異性；
? 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR產(chǎn)物污染，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確；
? 適用范圍廣，已成功用于非洲豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、哈維氏弧菌、蝦肝腸胞蟲和副溶血性弧菌等檢測；
? 穩(wěn)定性好，在反復(fù)凍融、預(yù)混液、常溫、37℃等條件下保存，均可穩(wěn)定擴(kuò)增。
多重PCR檢測
以牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）cDNA、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）cDNA、非洲豬瘟病毒（ASFV）質(zhì)粒、偽狂犬病病毒（PRV）gDNA混合物為模板，進(jìn)行qPCR檢測。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品可進(jìn)行4重檢測。
高靈敏度、高擴(kuò)增效率
分別以不同濃度豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）（10 pg、0.1 pg、0.01 pg）和牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）（100 pg、1 pg、0.1 pg）的cDNA為模板，使用TransGen、Company V、Company T產(chǎn)品進(jìn)行qPCR檢測。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品靈敏度可達(dá)0.1 pg，擴(kuò)增效果優(yōu)于Company V與Company T。
穩(wěn)定性好
批次穩(wěn)定性
使用不同批次的TransGen產(chǎn)品進(jìn)行單重和四重qPCR檢測。結(jié)果表明，TransGen產(chǎn)品可保障穩(wěn)定的批次重復(fù)性。
凍融穩(wěn)定性
使用0、5、10、15、20次反復(fù)凍融保存處理后的TransGen產(chǎn)品進(jìn)行單重和四重qPCR檢測。結(jié)果表明，反復(fù)凍融后TransGen產(chǎn)品性能不受影響，仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
預(yù)混穩(wěn)定性
將一重、二重和三重檢測基因的引物探針與TransGen產(chǎn)品進(jìn)行預(yù)混，并在不同溫度保存7天后進(jìn)行qPCR檢測。結(jié)果表明，TransGen預(yù)混液在不同溫度保存后仍可穩(wěn)定擴(kuò)增。
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